第九節(jié) 燒傷濕性醫(yī)療技術(shù)MEBO的抗菌作用實驗研究

作者：中國中西醫(yī)結(jié)合學會燒傷專業(yè)委員會 出版社：中國醫(yī)藥科技出版社 發(fā)行日期：2000年6月
　　【摘要】 觀察濕潤燒份膏 (MEBO)對有芽孢厭氧菌（破傷風桿菌)、無芽孢厭氧菌（脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌)和真菌(白色念珠菌) 等的抗菌作用。將上述細菌分別接種在含 MEBO的瓊脂培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)，觀察MEBO 對細菌的作用。實驗結(jié)果 MEBO 使細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)培養(yǎng)特性等方面發(fā)生變異，并明顯地影響細菌的生長繁殖速度和侵袋力。結(jié)果表明 MBBO 具有較強的廣譜抗菌作用。
　　【關(guān)鍵詞】　MEBO 抗菌作用　厭氧菌　真菌　細菌變異
　　大量燒傷創(chuàng)傷病人采用濕潤暴露療法用 MEBO 治療的臨床資料表明，MEBO 具有較強的控制燒傷創(chuàng)面感染的能力，其作用機制是多方面的。本實驗觀察了 MEBO 使厭氧菌芽孢桿菌一破傷風桿菌、無芽孢厭氧菌-脆弱類桿菌和痤瘡丙酸桿菌、真菌一白色念珠菌等在形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落特點和致病性等方面發(fā)生變異。實驗研究結(jié)果表明，燒傷濕潤暴露療法的MEBO具有較強的廣譜抗菌作用，又能給子被燒傷破壞了的機體局部皮膚組織殘存細胞以維持正常生命的環(huán)境和促進分裂再生的條件,是一種具有雙向調(diào)節(jié)作用的藥物。
材料和方法
　　1.材料 MEBO：北京光明中醫(yī)燒傷創(chuàng)瘍研究所研制。B224 型厭氧培養(yǎng)缸：濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科任全君研制。厭氧培養(yǎng)基：上海生物制品研究所。菌種：脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌，購自上海醫(yī)科大學。破傷風桿菌、白色念珠菌，由濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院院檢驗科提供。以上細菌經(jīng)厭氧瓊脂培養(yǎng)基傳代后備用。
　　2.方法及分組
　?。?）(MEBO 試驗組：將四種細菌(脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌、破傷風桿菌和白色念珠菌)分別接種在含有一定濃度 MEBO 的培養(yǎng)基上。厭氧菌置于厭氧培養(yǎng)缸 37°C培養(yǎng)48~72h為代。白色念珠菌置于恒溫箱37C培養(yǎng)48~721為一代。連續(xù)傳代4~6代，每代進行革藍染色(Gram's),觀察細菌的染色反應及形態(tài)大小、菌落特點等。
　　(2)正常對照組：以上四種細菌在接種到含 MEBO 的培養(yǎng)基前（原代菌）進行 Gram's, 觀察細菌形態(tài)、大小及菌落特點等。
檢測指標
　　1.細菌變異現(xiàn)象的觀察
　　(①)觀察破傷桿菌、脆弱類桿菌和痤論丙酸桿菌：將上述三種細菌分別接種在含有一定濃度MEBO 的培養(yǎng)基上，進行傳代培養(yǎng)后觀察每代細菌的形態(tài)、菌落等的變異現(xiàn)象。
　　(2觀祭白色念珠菌在含 MEBO 培養(yǎng)基上的變異現(xiàn)象。
　　2.芽管試驗
　　將原代菌及在 MEBO 培養(yǎng)基上傳代的1~2代、5~6代白色念珠菌分別接種在0.5ml人血清液體培養(yǎng)基中，置于37°C水浴箱水浴 3h，取菌涂片、染色、計數(shù)500個白色念珠菌，求其芽管產(chǎn)生百分率。
　　3.MEBO 對細菌生長速度的影響 將在含有 MEBO 的培養(yǎng)基上傳代的第 10代金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和原代金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌用無菌取菌環(huán)分別取相同的菌落，研磨于0.1ml 鹽水中，再加鹽水至 1ml.分別取菌置于血球計數(shù)盤上計數(shù)細菌數(shù) /ml迓行比較。
　　4. MEBQ 對綠膿桿菌侵襲力的影響　取在MEBO 培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)的第 10代綠膿桿菌和在普通培養(yǎng)基上培養(yǎng)的原代綠膿桿菌，分別取菌落于鹽水中計數(shù)、稀釋，使其含細菌數(shù)為3 ×109/m1。然后再取菌液分別給小鼠皮內(nèi)注射0.Iml，201后處死。于注射細菌部位，由皮膚到肌冉皮膚到肌層，取一長方形組織塊，進行固定包埋，組織切片，HE染色等。觀察病理變化。
　　2.MEBO對白色念珠菌的作用  見表5-9-2。
討　論
　　細菌生長繁殖迅速，世代周期短（一般20min 為一代)。因此，有些細菌在繁殖過程中易受環(huán)境中不利因素的影響而發(fā)生細菌性狀的變異。如細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的變異、培養(yǎng)特性、毒力、抗原性和耐藥性等方面的變異。細菌形態(tài)的變異與細菌的分裂有關(guān)。細菌分裂過程是一復雜的過程，它對環(huán)境中非致死性不利因素作用的敏感性比蛋白質(zhì)或DNA 合成對有害物質(zhì)的敏感性更大。因此，細菌細胞可出現(xiàn)多形態(tài)—多核絲狀或圓球狀等變異，如破傷風桿菌、脆弱類桿菌。這是由于細胞壁合成妥影響不能及時形成或斷裂，而代謝仍在進行有關(guān)。細菌性狀變異的發(fā)生與作用于細菌的不利因素的強度、作用的時間有密切關(guān)系。從本實驗中清楚地觀察到，同一種細菌和在含不同濃度MEBO 的培養(yǎng)基上出現(xiàn)形態(tài)變異的時間及形態(tài)變異的特點是有差異的。
　　本實驗觀察了 MEBO 對破傷風桿菌、脆弱類桿菌、痤瘡丙酸桿菌和白色念珠菌等的抗菌作用。這些細菌都是人體正常菌群，屬于條件致病菌，在一定條件下可致病，大多數(shù)屬于內(nèi)源性感染。燒傷病人由于大量應用抗生素，易造成菌群失調(diào)，導致條件致病菌白色念珠菌的感染，時有報道。燒傷創(chuàng)面的細菌感染，需氧菌（如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌等）仍是優(yōu)勢菌。由于燒傷創(chuàng)面可發(fā)生缺血壞死，也易被漏檢。王德旺 等（1983年)報告 34例燒傷創(chuàng)面厭氧芽孢桿菌培養(yǎng)陽性率為 23.9%，且均為多菌性混合感染。
　　破傷風桿菌屬于厭氧芬孢桿菌，在含 MEBO 的培養(yǎng)基中傳代后，出現(xiàn)長絲狀變異，在第3三代有較多的菌體形成芽孢。我們知道細菌是以二分裂法進行繁殖，具有繁殖能力的菌體稱為繁殖體。一個細菌只形成一個芽孢，一個芽孢在適宜條件下也只生成一個菌體（繁殖體），細菌數(shù)量并不增多，所以細菌芽孢的形成并非細菌繁殖方式，而是細菌對營養(yǎng)缺乏等不利因素環(huán)境的一種反應，此時細菌的生命活動處于休眠狀態(tài)，代謝緩慢，但芽孢保持了細菌的生命活動。芽孢在不適宜因素存在的環(huán)境中是不能形成繁殖體而進行繁殖的。破傷風桿菌屬于厭氧菌，只有在一定條件下細菌才能進行繁殖，產(chǎn)生外毒而致病。同樣，白色念珠菌以出芽方式進行繁殖，在含 MEBO 的培養(yǎng)基上傳代至第6代，見到芽生孢子較正常念珠菌的芽生孢子要少得多，芽管產(chǎn)生率由正常的90%降至 0.5%~2%。由此可見，MEBO對破傷風桿菌、白色念珠菌的生長繁殖、致病性等產(chǎn)生的影響。
　　從表5-9-3可見到要含 MEBO 培養(yǎng)基上傳代至第10代的綠膿桿菌，經(jīng)20h培養(yǎng)，菌落的細菌數(shù)/ml 與原代細菌相比減少約29/30倍，對小鼠機體組織的侵襲力顯著降低。結(jié)果說明細茵處于不利因素的條件下，不僅使細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生交異，而且它的生理特性也隨之發(fā)生了變化。
　　實驗硏究曾觀察了MEBO 對燒傷感染常見的G+需氧菌金黃色葡萄球菌、G 菌大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等的抗菌作用，和本實驗對G有芽孢厭氧菌（破傷風桿菌）、G無芽孢厭氧菌（痤瘡丙酸、脆弱類桿菌）及真菌(白色念珠菌）等的抗菌作用。實驗研究結(jié)果和臨床研究資料表明，MEBO 是一種具有較強的廣譜抗菌作用和促進燒傷創(chuàng)面愈合的雙向調(diào)節(jié)作用的藥物。