圖5　培養(yǎng)第50天。圖5A為對(duì)照組，圖5B為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組中的小腸組織細(xì)胞或細(xì)胞克隆已經(jīng)死亡，實(shí)驗(yàn)組中顯示的是兩塊小腸粘膜組織。
圖6　培養(yǎng)第85天。圖6A為對(duì)照組，圖6B為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組中的小腸組織細(xì)胞或細(xì)胞克隆已經(jīng)死亡，實(shí)驗(yàn)組中顯示的是一塊小腸粘膜組織。
圖7　培養(yǎng)第90天。圖7A為對(duì)照組，圖7B為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組中的小腸組織細(xì)胞或細(xì)胞克隆已經(jīng)死亡，實(shí)驗(yàn)組中顯示的是大量的分散生長的小腸組織細(xì)胞。
圖8　培養(yǎng)第97天。圖8A為對(duì)照組，圖8B為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組中的小腸組織細(xì)胞或細(xì)胞克隆已經(jīng)死亡，實(shí)驗(yàn)組中顯示的是一塊由細(xì)胞連接起來的片狀結(jié)構(gòu)。

　　GIC可使離體腸粘膜細(xì)胞在培養(yǎng)液中重新連接組合成粘膜組織

　　現(xiàn)在一般均采用Trowell法進(jìn)行體外小腸粘膜組織的器官型培養(yǎng)，此法從人體或動(dòng)物經(jīng)口腔取材，取材部位為十二指腸遠(yuǎn)端和空腸近端，將取出的粘膜（不可能是純粹的粘膜組織，應(yīng)該還包括粘膜下層、肌層等等，這與我們的做法一致），將粘膜放在金屬網(wǎng)格上，然后粘膜連同網(wǎng)格一起置于多孔培養(yǎng)板中央的孔，其它孔中置入無菌生理鹽水浸泡過的無菌紗布以便保持濕度，蓋好，置入一個(gè)密閉容器中，通95%的氧氣和5%的，37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。這是目前通用的方法。但此法有明顯的缺點(diǎn)，即方法較為繁瑣，取材量有限，一般每次不能多于10塊活組織，多了容易引起胃腸道出血，取材量受到限制，我們現(xiàn)在采用的方法對(duì)其進(jìn)行了很大的簡化，直接從新處死的胚胎動(dòng)物體內(nèi)獲得無菌小腸粘膜組織，取材過程極容易控制量，也容易控制部位，特別方便快捷。

　　由于體外培養(yǎng)目前還沒有適宜的人工合成培養(yǎng)基，現(xiàn)有的報(bào)道體外培養(yǎng)的小腸粘膜組織維持存活時(shí)間較短，不管是用RPMI-1640培養(yǎng)基（附加葡萄糖、胰島素、谷氨酰胺和胎牛血清），還是用Trowell培養(yǎng)基（附加胎牛血清），細(xì)胞均最多存活24~48小時(shí)，之后就會(huì)出現(xiàn)退化和死亡，一般很難超過48小時(shí)，培養(yǎng)基中如果不加血清，時(shí)間更短，6~12小時(shí)會(huì)退化壞死，由于植塊存活時(shí)間短，給實(shí)驗(yàn)者提供的檢測時(shí)間也很短，使多項(xiàng)目檢測不可能，只能檢測那些用藥之后立即就出現(xiàn)的反應(yīng)，長期效應(yīng)無法觀察，使實(shí)驗(yàn)受到了很大限制。而在本實(shí)驗(yàn)中我們使用的含有GIC細(xì)胞高級(jí)培養(yǎng)基直接打破了現(xiàn)有培養(yǎng)基方面的限制，可以長期培養(yǎng)離體腸粘膜組織，可以長期在光鏡下直接觀察GIC對(duì)粘膜生長的影響。

　　本實(shí)驗(yàn)中，GIC對(duì)腸粘膜組織的細(xì)胞保護(hù)作用也得到了明顯體現(xiàn)；對(duì)于培養(yǎng)過程中觀察到的片狀粘膜組織，之所以能存在很久時(shí)間，并且其內(nèi)的細(xì)胞生長良好，是GIC對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的正常代謝產(chǎn)生了影響，細(xì)胞外基質(zhì)是維系細(xì)胞相互連接的基礎(chǔ)。

　　為什么胃粘膜能夠在這種環(huán)境中長期生長呢？有兩個(gè)原因：一是GIC是營養(yǎng)豐富的細(xì)胞培養(yǎng)基及良好的細(xì)胞保護(hù)劑，另一個(gè)是腸道粘膜組織中有粘膜上皮干細(xì)胞，GIC啟動(dòng)了干細(xì)胞，使干細(xì)胞得以較長時(shí)間地生長。

　　對(duì)于第一個(gè)問題的解釋：

　　GIC有效成分中含有的亞油酸是細(xì)胞必需的脂肪酸，是構(gòu)成細(xì)胞生物膜不可缺少的組分，是皮膚、粘膜及深層組織損傷后進(jìn)行修復(fù)的重要材料；有效成分中含有的多種氨基酸如蛋氨酸、半胱氨酸、精氨酸、亮氨酸以及多種脂類物質(zhì)、維生素、微量元素，為腸粘膜細(xì)胞的生長提供了豐富的營養(yǎng)；有效成分還具有抗病原微生物作用，對(duì)多種細(xì)菌、病毒、真菌、原生物都有較強(qiáng)的抑制作用，同時(shí)具有抗炎作用；藥物中的有效成分還可以促進(jìn)細(xì)胞的能量代謝，蛋白質(zhì)及核酸合成和生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)等功能；緩慢釋放，使細(xì)胞持續(xù)得到穩(wěn)定的營養(yǎng)供應(yīng)。

　　GIC的抗氧化作用表現(xiàn)為抗自由基、穩(wěn)定細(xì)胞膜。自由基是廣泛存在于各種化學(xué)反應(yīng)中的活潑基團(tuán)，倘若其產(chǎn)生過量，從而引發(fā)所謂的自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，則將導(dǎo)致細(xì)胞膜多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過氧化，所產(chǎn)生的大量脂質(zhì)過氧化物會(huì)損傷細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)的大分子蛋白質(zhì)與核酸，對(duì)細(xì)胞造成損傷。有效成分中維生素E的抗自由基功能是由于其自身結(jié)構(gòu)具有還原性，進(jìn)而捕捉自由基從而阻斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，起到對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用，而其自身則經(jīng)過維生素C和含硫氨基酸的再生而還原或轉(zhuǎn)變?yōu)轷惢衔�。大量維生素E的存在可使細(xì)胞處于流動(dòng)性高、通透性嚴(yán)密的狀態(tài)。這除了可保護(hù)膜上大量的多不飽和脂肪酸不被氧化外，還與其可以保護(hù)膜蛋白的活性結(jié)構(gòu)有關(guān)。

　　對(duì)于第二個(gè)問題的解釋：

　　腸道粘膜組織中有粘膜上皮干細(xì)胞，在合適條件下能夠長期生長，GIC有能力啟動(dòng)干細(xì)胞使之活化。腸道粘膜的上皮組織來源于上皮干細(xì)胞（epithelial stem cell）， 用-胸腺嘧啶脫氧核苷（-TdR）標(biāo)記放射自顯影法觀察瞬間標(biāo)記后的腸腺細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，上皮干細(xì)胞位于或靠近腸隱窩的部位。為了維持動(dòng)態(tài)平衡，這些干細(xì)胞不斷轉(zhuǎn)化為短暫繁殖細(xì)胞并向中段移動(dòng)，最后要么分化為具有吸收功能的刷狀緣上皮細(xì)胞，要么分化為腸道內(nèi)分泌細(xì)胞。分化后的細(xì)胞最后死亡并且從腸絨毛上脫落下來并進(jìn)入腸腔，任何干細(xì)胞都具有生長繁殖的能力，它們是一群分化較低的細(xì)胞，這是干細(xì)胞與分化細(xì)胞明顯的不同，體外培養(yǎng)中最容易增殖的正常細(xì)胞是干細(xì)胞，干細(xì)胞屬于未分化細(xì)胞，盡管脫離了體內(nèi)生長的微環(huán)境，但仍然具有較強(qiáng)的增殖能力�？梢詳嘌杂捎贕IC具有激活表皮干細(xì)胞的能力，對(duì)粘膜干細(xì)胞也應(yīng)該有相應(yīng)的激活能力。

　　至于生長的細(xì)胞的性質(zhì)，我們認(rèn)為一定是粘膜細(xì)胞，主要原因有兩個(gè)：一是因?yàn)樯掀じ杉?xì)胞在體外有較強(qiáng)的增殖功能，這已經(jīng)為許多研究結(jié)果所證實(shí)，腸壁其它細(xì)胞均不具備這種能力，本實(shí)驗(yàn)所用的標(biāo)本中，除粘膜細(xì)胞外，數(shù)量最多的應(yīng)該是腸壁的平滑肌細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞在體外可進(jìn)行有限的增殖，但不能長期增殖。本實(shí)驗(yàn)完全可以排除平滑肌細(xì)胞生長的可能性，因?yàn)榕囵B(yǎng)自始至終未曾發(fā)現(xiàn)形態(tài)呈條形或梭形、排列呈束狀的平滑肌細(xì)胞生長。再次，目前還沒有發(fā)現(xiàn)平滑肌干細(xì)胞，這也是平滑肌在體外不易長期生長的重要原因。其它細(xì)胞如粘膜下層疏松結(jié)締組織中的動(dòng)脈、靜脈、淋巴管、神經(jīng)纖維和粘膜下神經(jīng)叢等組織的細(xì)胞能如此生長的可能性極小。第二個(gè)原因是優(yōu)勢(shì)生長的問題，當(dāng)某種細(xì)胞特別容易生長的時(shí)候，其它細(xì)胞的生長就會(huì)受到一定程度的抑制或者完全被抑制，本實(shí)驗(yàn)中腸粘膜細(xì)胞在生長中占優(yōu)勢(shì)或絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。

參　考　文　獻(xiàn)

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